猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

产品信息

产品名称
通用名：猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection Pseudorabies Virus gE Antibody

包装规格

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

伪狂犬病（Aujeszky's disease）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus, PRV）引发的一种急性传染病，特征包括高热、剧痒、呼吸道和神经系统疾病。由于gE基因缺失疫苗是该病的免疫预防方法，因此通过检测gE蛋白的抗体，可以作为野毒感染的指标。该试剂盒旨在检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体，能够有效区别临床野毒感染的猪与接受gE基因缺失疫苗免疫的猪。

试剂盒组成

序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5
1 | 酶标记物 | 11ml×1(红盖) | 11ml×2(红盖) | 26ml×2(红盖)
2 | 样品稀释液 | 25ml×1(黄盖) | 50ml×1(黄盖) | 125ml×1(透明)
3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(透明)
4 | 底物显色液 | 10ml×1(黑盖) | 10ml×2(棕盖) | 25ml×2(黑盖)
5 | 终止液 | 5ml×1(黄盖) | 10ml×1(黄盖) | 25ml×1(黄盖)
6 | 阳性对照 | 10ml×1(绿盖) | 15ml×1(红盖) | 20ml×1(红盖)
7 | 阴性对照 | 10ml×1(绿盖) | 15ml×1(绿盖) | 20ml×1(绿盖)
8 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5
- | 盖板膜 | 125 | 10 | -
- | 自封袋 | 112 | 11 | -
- | 说明书 | 111 | 12 | -
- | 稀释板 | 125 | - | -

储存及有效期

应在2～8℃条件下储存，有效期为12个月。开封的包被板需在2～8℃避光保存，并避免受潮，使用期限为2个月。

适用仪器

采用630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备以及可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，4000r/min离心10分钟，收集血清；或待血液自然凝固后收集血清。收集的血清需清亮且无溶血。
2. 使用样品稀释液将血清按1:1稀释（例如：将100μl血清加入100μl样品稀释液中混匀）。阴性和阳性对照不需稀释。
3. 浓缩洗涤液需恢复至室温后用蒸馏水或去离子水按20倍稀释至工作洗涤液（例如：19份蒸馏水加1份浓缩洗涤液），如有结晶需加热溶解后使用。
温馨提示：先使用血清稀释板稀释完所有待检血清，再将稀释好的血清转移到抗原包被板上，确保反应时间一致。

检验方法

1. 使用前将试剂盒放置于室温30分钟以恢复温度。
2. 取所需数量的酶标板条，设定阴性、阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封并保存于2～8℃。
3. 在阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4. 混匀后盖上盖板膜，在37℃（推荐水浴）避光反应1小时。
5. 去除孔内液体，每孔加入300μl工作洗涤液，无需静置，然后重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入酶标记物100μl，再盖好盖板膜，在37℃避光反应20分钟。
7. 如步骤5洗涤。
8. 每孔加入底物显色液100μl，在室温(20～25℃)避光反应10分钟。
9. 每孔加入终止液50μl，混匀后于10分钟内在630nm下测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验情况下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≥0.6，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≤0.5。

检验结果的判定

1. S为样品孔OD值，N为阴性对照OD平均值。如果S/N≤0.6，则判断为阳性；如果0.6＜S/N≤0.7，则判断为可疑；如果S/N＞0.7，则判断为阴性。
2. 本实验结果为阳性表明该猪可能存在野毒感染，或是使用非gE基因缺失疫苗免疫的。

试验方法的局限性

本检测结果仅供筛查参考，不应作为确诊依据。

注意事项

1. 实验过程中需佩戴手套和工作衣，严格遵循消毒和隔离流程，所有实验废弃物应按照传染物进行处理。
2. 终止液具有腐蚀性，须避免与皮肤和衣物接触，如不慎接触，请立即用大量自来水冲洗。
3. 如果试剂盒中的阳阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，这是正常现象。
4. 酶标板取出后需在室温下恢复后方可开封，未用完的板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
5. 浓缩洗涤液在低温下可能结晶，使用前需恢复至室温以确保其完全溶解。
6. 洗涤时需确保每孔均充满液体，以避免孔口有游离酶无法清洗。
7. 待测样品应保持新鲜。
8. 检验结果判定须以酶标仪读数为依据。
9. 不同批次的试剂成分不可混用。