## 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（以SD大鼠为例）

### 实验材料准备

在进行大鼠脂肪间充质干细胞的提取之前，首先需准备好相关实验材料。选择约2周龄或体重约200克的SD大鼠。材料清单包括灭菌器械如镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等，以及5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。此外，准备75%乙醇用于消毒，无菌PBS水、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等。培养基方面，需使用专门为SD大鼠脂肪间质干细胞制备的完整培养基。

### 实验操作步骤

在超净工作台内，将需要的器材放置齐全，并进行紫外消毒30分钟。接着，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶并进行过滤除菌。操作过程中，先将大鼠脱颈处死后，放入75%酒精中浸泡2-3分钟，随后固定在泡沫板上，打开腹股沟区皮肤，暴露脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并放入PBS中，注意避免剪到血管。

用PBS清洗取下的脂肪组织，并剔除过多的血管和淋巴结。将脂肪组织剪成适当大小（如2mm×2mm），加入胶原酶进行37℃下消化，每隔5分钟震荡一次或者持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，经过离心后弃去上层脂滴泡沫和上清液，再用培养基重悬沉淀。

此后，将细胞悬液进行过滤，再次离心后弃去上清液，用培养基重悬，并接种到培养瓶中。最后，将培养瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养，以便获取高质量的脂肪间充质干细胞，确保下来每一步操作都遵循严格的无菌原则。

### 注意事项

在整个实验过程中，保持无菌操作至关重要，以有效避免细胞污染。在剪取和清洗脂肪组织的过程中，需要格外小心，以避免损伤细胞或引入杂质。此外，消化过程中的时间和温度控制也非常重要，过度消化可能导致细胞受损。在离心和过滤时，应采取温和的操作方式，以防细胞的损失或破裂。

通过充分遵循上述步骤与注意事项，您将能够有效地提取脂肪间充质干细胞，在未来的研究和临床应用中发挥其重要的作用，其中尊龙凯时致力于推动生物医疗领域的发展，为更多科研人员提供优质的实验服务与支持。